免疫共沉淀技术（Co-IP）

服务介绍

Co-IP 主要用于蛋白-蛋白相互作用检测，是一种以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究体内蛋白质相互作用的经典方法。

两大主流应用方向：

1. 靶向验证（Co-IP WB）：验证两个已知蛋白是否存在体内相互作用；

2. 互作蛋白筛选（Co-IP LC-MS/MS，CoIP-MS）：寻找与诱饵蛋白结合的未知互作蛋白，构建蛋白互作网络。

技术原理

将靶蛋白X与目标蛋白Y在细胞内共同孵育，形成复合物X-Y。如果用靶蛋白X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种已知蛋白是否在体内结合，也可用于确定细胞内是否存在与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

服务优势

• 抗体规范：标准化抗体用量与信息追溯，实验重复性与可追溯性强；

• 严谨对照：Input   IgG 双对照标配，数据满足 SCI 期刊发表要求；

• 灵活拓展：CoIP-WB 靶向验证 / CoIP-MS 高通量筛选，按需选择；

• 完整交付：原始数据   实验报告   技术解读。

客户提供

• IP抗体：每次实验抗体投入量≥10 μL；CoIP-WB 实验体系中，猎物抗体每次用量为 10 μL；（所有分装抗体需配套提供抗体说明书或品牌及货号信息）

• 细胞：将1×10⁷个细胞进行离心处理，收集细胞沉淀，细胞沉淀体积控制在 50–100 μL，样品采用干冰条件运输。

交付结果

实验报告内容包括抗体信息及结果分析完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。

交付周期

一般为25个工作日。

常见问题与解析（Q&A）

• 如何区分蛋白直接相互作用与间接相互作用？

回复： Co-IP 仅能验证细胞内生理状态下存在蛋白复合物，无法区分蛋白是直接结合，还是通过第三个蛋白形成间接复合物。

补充方案：如需验证直接结合，可进一步开展 GST pull down、体外蛋白互作实验来佐证。

• 什么情况下建议选择 CoIP-MS，而非单纯 CoIP-WB？

回复：已知靶蛋白，需要筛选未知全新互作蛋白，推荐 CoIP-MS；已经锁定两个目标蛋白，仅需验证二者互作关系，选择 CoIP-WB 靶向验证即可；也可先质谱筛选，再使用 CoIP-WB 完成后续验证。

• 为什么推荐优先使用IP验证级抗体？普通抗体为什么不适用？

回复：普通WB抗体仅识别变性线性表位，而Co-IP需要识别蛋白天然折叠构象，普通抗体无法结合天然状态靶蛋白，会直接导致IP捕获失败，是实验阴性的核心人为因素。

• 反向Co-IP 有什么必要？什么情况必须做？

回复：单向Co-IP仅能证明A蛋白沉淀B蛋白，存在单向结合假象和抗体偏好性结合风险，部分蛋白存在空间位阻，单方向捕获无法验证真实互作。课题需要严谨结论、用于SCI发表时，必须进行反向Co-IP验证，双向佐证蛋白互作真实可靠，大幅提升论文说服力。