实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR)/RT-qPCR，是指在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结果验证、药效分析等。

技术原理

PCR过程中，当延伸结束时，形成双链DNA，SYBR Green结合到双螺旋小沟中，SYBR Green受到适当光源激发，可发射出荧光，从而反映产物浓度。（探针的5′端标记有报告基团（Reporter, R），3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q）。当探针完整，R发射的荧光能量被Q基团吸收，无荧光。在PCR的过程中，Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，荧光报告基团发射荧光，从而反映产物浓度。

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服务优势

高灵敏度和高特异性：通过荧光信号的实时监测，可以精确定量目标DNA序列的丰度，具有高灵敏度和高特异性。
快速和高通量：qRT-PCR反应时间相对较短，可以在较短时间内完成大量样品的分析，适用于高通量实验。
定量范围广： qRT-PCR可以在非常低的目标DNA浓度范围和非常高的目标DNA浓度范围内进行定量，具有广泛的定量范围。
可靠性和准确性：通过内部标准和质量控制，可以减少样品间和批次间的变异性，提高结果的可靠性和准确性。

客户提供

样品及尽可能详细的背景信息（如物种信息，扩增目的基因序列，相关文献和样品来源等）。
样品：组织应不少于10 mg；
细胞：≥10^5个细胞；
RNA：总RNA浓度须大于1 μg；组织需液氮速冻，细胞收获后加入Trizol保存于-80 ℃。
样品用干冰寄送，避免各类污染和反复冻融。

（如您想下单本服务，下载下方送样单并联系我司13545116862）

外泌体单项检测送样单模板-2026.docx

交付结果

溶解曲线、Ct值及完整实验报告；
实验报告内容包括引物序列、荧光定量PCR原始数据及分析结果；
荧光定量PCR完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。

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交付周期

一般为4个工作日

常见问题与解析 (Q&A)

进行外泌体RNA RT-PCR实验推荐什么内参？

取决于具体样品，可以选择外源添加cel-miR-39-3p或内源U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72作为内参。

Ct值很大（35）或无Ct值怎么办？

常见原因：

① 目标基因表达量过低

例如：lncRNA低丰度表达和某些转录因子

解决：增加模板量/优化逆转录体系/选择更灵敏检测方法

② 引物设计问题可能：引物效率低/特异性差/扩增片段过长

建议：产物长度80–200 bp/引物Tm值约58–62℃/扩增效率90%–110%。

合作案例

FAT1基因上调与免疫抑制性肿瘤微环境相关，并可预测非小细胞肺癌免疫检查点疗法的不良预后

Title(E): FAT1 upregulation is correlated with an immunosuppressive tumor microenvironment and predicts unfavorable outcome of immune checkpoint therapy in non-small cell lung cancer

期刊名称：Heliyon

期刊IF：3.6

PMID:38560204

LINC00862和RBM47之间的正反馈回路在抑制肝细胞癌中的作用

Title(E): The role of positive feedback loop between LINC00862 and RBM47 in hepatocellular carcinoma suppression

期刊名称：Genes & Diseases

期刊IF：9.4

doi: https://doi.org/10.1016/j.gendis.2025.101763

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