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IF=14.5 工程化 CAR-T 衍生外泌体共递送 miR-145 和细胞毒性蛋白，用于靶向实体肿瘤治疗文章通过工程化源自 B7-H3 靶向 CAR-T 细胞的外泌体并将其装载 miR-145（将此外泌体命名为 exo-CT-145）来开发一种生物活性、无细胞治疗平台。外泌体保留了CAR特异性表面标志物和细胞毒性有效负载（穿孔素和颗粒酶），MiR-145在多种肿瘤中低水平表达，可以通过多种途径抑制肿瘤的发生和发展。 Exo-CT-145 显着抑制食管鳞状细胞癌 (ESCC) 细胞的增殖、迁移和上皮间质转化 (EMT)，并在体外诱导细胞凋亡。在体内，exo-CT-145 表现出肿瘤靶向积累、caspase-3 激活、EMT 逆转、血管生成抑制和重塑肿瘤微环境，同时未检测到 CRS 或全身毒性。这项研究提出了一种整合抗原特异性杀伤和基因调控的协同纳米治疗范式，为实体瘤治疗提供了一个有前途的方向，提高了安全性和有效性。 CAR-T疗法的局限 CAR-T细胞疗法在血液肿瘤中效果显著，但在实体瘤中面临以下挑战：肿瘤浸润困难、肿瘤微环境的免疫抑制、可能引发严重的细胞因子释放综合征（CRS），以及系统性毒性限制临床安全性。 外泌体的优势 外泌体是天然存在的纳米级细胞外囊泡（30-150 nm），可作为无细胞治疗载体。CAR-T来源的外泌体保留了CAR靶向能力和细胞毒性蛋白（穿孔素、颗粒酶），同时规避了活细胞治疗的毒性风险。其纳米尺寸利于肿瘤组织渗透。 miR-145的抑癌作用 miR-145在多种肿瘤中表达下调，具有抑制增殖、迁移和上皮-间充质转化（EMT）的作用，并可增强化疗敏感性。在食管鳞状细胞癌（ESCC）中，miR-145通过靶向PI3K/AKT、PLCE1等通路发挥抑癌功能。 研究空白 目前缺乏将CAR-T外泌体的直接杀伤功能与miRNA基因调控功能相结合的实体瘤治疗策略。 本研究构建了一种工程化CAR-T来源外泌体，命名为exo-CT-145，该外泌体同时装载了以下三种功能组分：靶向B7-H3的嵌合抗原受体（CAR）、细胞毒性蛋白（穿孔素和颗粒酶B），以及抑癌因子miR-145。 主要实验设计包括三个部分： 第一部分：外泌体的构建与表征 研究人员制备了靶向B7-H3的CAR-T细胞，从中分离外泌体并装载miR-145，随后通过透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析、Western Blot和ELISA等方法对外泌体进行表征。 第二部分：体外功能验证 包括细胞摄取实验、MTT增殖抑制实验、划痕实验、Transwell迁移与侵袭实验、流式细胞术检测凋亡，以及Western Blot检测凋亡和EMT相关蛋白的表达。 第三部分：体内抗肿瘤研究 采用裸鼠ESCC皮下移植瘤模型，通过尾静脉分别注射PBS、对照外泌体exo-T、未装载miR-145的exo-CT以及工程化外泌体exo-CT-145，检测指标包括肿瘤体积、肿瘤重量、生存曲线、生物分布以及安全性指标（体重、主要器官HE染色、肝肾功能、细胞因子水平）。 外泌体构建成功 exo-CT-145平均粒径115 nm，颗粒浓度5.97×10¹¹颗粒/mL，CAR含量0.56 ng/μg，miR-145表达量提高30倍以上。证明该平台构建可行。 靶向性良好 exo-CT-145被B7-H3阳性ESCC细胞高效摄取，正常细胞摄取低；体内肿瘤部位富集信号比对照高6倍。证明实现精准递送。 抑制增殖、迁移与侵袭 外泌体处理后KYSE150存活率降至29%，KYSE30降至42%；侵袭减少70%-75%，迁移率从约60%降至13%。证明对肿瘤细胞有选择性杀伤作用。 诱导凋亡并逆转EMT 外泌体处理后凋亡率增加34%-41%；Caspase-3/9激活，Bax升高、Bcl-2降低；E-cadherin升高、N-cadherin降低。证明激活凋亡通路并逆转EMT。 抑制血管生成 外泌体处理后CD31、VEGF、MMP9表达下降，HUVEC血管形成受抑。证明具有抗血管生成作用。 体内抑制肿瘤生长 肿瘤体积从1078 mm³降至205 mm³，重量从0.934 g降至0.34 g，中位生存期延长至59天。证明体内抗肿瘤效果显著。 安全性良好 体重稳定，主要器官无损伤，肝肾功能正常，无细胞因子风暴。证明规避了传统CAR-T的主要安全性问题。 文章标题 Engineered CAR‐T Derived Exosomes Co‐Delivering miR‐145 and Cytotoxic Proteins for Oesophageal Squamous Cell Carcinoma Therapy 发表期刊 Journal of Extracellular Vesicles 发表年份 2026年 卷/期/页码 2026年第3卷，第1至19页 DOI 10.1002/jev2.70245 通讯作者 Shegan Gao、Yuan Wan、Gaofeng Liang 第一作者 Ruyue Yang 关键词 血管生成、嵌合抗原受体T细胞、上皮-间充质转化、食管鳞状细胞癌、外泌体、microRNA-145 资助项目 国家重点研发计划（2022YFE0132800）、河南省重点研发项目（221111310600）、河南省科技研发计划联合基金（225200810020） 本公司围绕CAR-T来源外泌体工程化改造及实体瘤治疗研究，具备完整的技术服务体系。可承接外泌体分离纯化及表征鉴定（TEM形态、NTA粒径、WB标志蛋白及ELISA定量穿孔素/颗粒酶）。 具备外泌体核酸装载平台，高效完成miR-145等治疗性miRNA装载及qRT-PCR验证。 体外功能平台可开展细胞摄取、增殖抑制（MTT/CCK-8）、迁移侵袭（划痕/Transwell）、凋亡检测（流式Annexin V/PI）、EMT及凋亡通路蛋白WB检测。 体内具备皮下移植瘤模型构建、尾静脉给药、活体成像示踪、肿瘤生长曲线及生存期分析、脏器HE染色及肝肾功能/细胞因子安全性评价等全套服务能力。 我司现已为多家科研单位及药企完成外泌体相关横向课题，欢迎咨询合作。 |
