IF=14.5 间充质基质细胞来源的细胞外囊泡通过调控TNFα驱动肌肉与神经再生

采用符合良好生产规范（GMP）的MSC-EVs进行干预处理，同时设置TNFα抑制剂（SPD304）、miR-145-5p抑制剂等对照分组，通过对比分析，明确TNFα及相关分子在肌肉与神经再生过程中的调控作用。

① 2D共培养模型中，肌毒素（CTX）诱导的肌肉损伤会显著降低人肌肉前体细胞（hMPCs）的肌生成融合指数；而经EVs处理后，肌生成融合指数可恢复至未损伤样本的正常水平，表明MSC-EVs能够有效保护肌管免受急性损伤，显著提升肌肉前体细胞的肌生成潜能。同时，巨噬细胞的加入可进一步提高肌生成融合指数，印证了其在肌肉细胞分化成熟过程中的辅助调控作用。

② 研究优化了人肌肉脱细胞方法，该方法可有效保留细胞外基质（ECM）的关键蛋白结构及机械性能；基于此构建的3D肌肉模型具备电刺激收缩功能，能够良好模拟体内肌肉的生理状态。EVs处理可显著逆转CTX损伤导致的肌源性成分减少、促炎基因MCP1表达上调、抗炎基因ARG1表达下调等异常现象，同时减少细胞凋亡（降低cCAS3⁺细胞比例）、促进细胞增殖（提高Ki67⁺细胞比例），并推动巨噬细胞向抗炎M2表型（ARG1⁺）极化，从而缓解肌肉损伤后的炎症反应，促进肌肉修复。

③ 分子机制层面，CTX诱导的肌肉损伤会显著上调TNFα的基因及蛋白表达水平，而EVs处理可有效抑制TNFα的异常表达；此外，MSC-EVs富含miR-145-5p、miR-21-5p等与炎症调控及组织再生相关的微小RNA，EVs处理可下调损伤模型中异常升高的miR-145-5p，同时上调促肌源性分化因子MYOD的表达。进一步实验证实，抑制miR-145-5p会加剧TNFα的表达，明确了miR-145-5p在EVs调控TNFα表达、促进肌肉再生过程中的关键介导作用。此外，EVs处理还可上调抗炎细胞因子IL-10及趋化因子RANTES的表达，进一步强化抗炎效应，为肌肉再生创造有利微环境。

① LPS诱导的小胶质细胞神经炎症模型中，高剂量EVs处理可显著抑制LPS诱导的TNFα释放，同时提高小胶质细胞活力，明确证实了MSC-EVs具备强大的神经抗炎能力。

② 大鼠胚胎脊髓器官型3D模型实验显示，MSC-EVs可被神经元有效摄取；经EVs处理后，神经轴突的投射长度及数量均显著增加。同时，EVs可下调模型中miR-145-5p及TNFα的表达水平，上调与神经炎症调节及细胞生长相关的蛋白TIMP-1和ICAM-1的表达；抑制miR-145-5p会导致神经轴突投射长度缩短且TNFα表达上调，再次验证了MSC-EVs通过miR-145-5p/TNFα轴发挥促神经再生作用的分子机制。