样本收集细节

血浆样品

(1)用采血针和EDTA抗凝管抽取全血，轻柔上下颠倒混匀后室温或者4°C保存，并在1小时内进行下一步处理；

(2)4°C条件下，使用吊桶式转头1900g离心10min，小心吸取上清即为血浆，最后500μl左右丢弃。得到的血浆再次离心，条件为4°C，3000g，15min，小心吸出血浆，注意不要碰到底部和侧面的沉淀物；

(3)将血浆冻存于-80°C；

提示：送样量最好4mL以上（分离4mL血浆约需要8-10mL全血）。

血清样品

（有条件的话尽量采用血浆，避免血小板来源的外泌体影响）

(1)用采血针和普通血清管（不含任何试剂，10mL规格）采血10mL；

(2)室温静置30min，然后4°C条件下，静置3～4小时（此时可见血块析出）；

(3)用移液器吸取上面的淡黄色血清（应该有4mL左右）转入15mL离心管中，4°C条件下3000g离心15min，小心取上清转入新的15mL离心管中，最大程度保证血清质量；

(4)离心后的血清15分钟内冻存于-80°C冰箱；

提示：送样量最好4mL以上（分离4mL血清约需要10—15mL全血）。

细胞上清

（需采用去除外泌体的培养基）

(1)细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70%-80%，悬浮细胞密度在60%-70%；

(2)对于贴壁细胞，去除原有培养基，换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300g，4°C，10min收集细胞；

(3)使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；

(4)收集细胞上清，300g，4°C，离心10min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；

(5)3000g，4°C，再次离心15min，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；

(6)取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片，合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4°C短期保存（1～2天），长期保存可冻存于-80°C。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4°C和-80°C，都会对产量有一定的影响；

（7）寄送时液体不要灌太满，防止结冰后体积膨胀泄露。

尿液

(1)采集前/中后段晨尿，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液100mL，并注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制，于4℃临时保存（不得超过8h）；

(2)并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)-80℃冰箱中保存。

脑脊液

(1)收集脑脊液10mL，采集方式为腰椎穿刺，样本一经分离，请务必立即置于冰上或4℃短暂保存（不得超过4h）,避免受到血液污染,勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放；

(2)并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)-80℃冰箱中保存。

腹水

(1)临床收集腹水后若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8h）；

(2)将采集到的腹水在4℃下（室温亦可）离心2000g，20min，去除腹水中的残渣；

(3)-80℃冰箱中保存。